近日，國家藥監(jiān)局發(fā)布了《人MTHFR基因多態(tài)性檢測(cè)試劑注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》（2025年第4號(hào)），人MTHFR基因多態(tài)性檢測(cè)試劑采用熒光探針PCR法，對(duì)預(yù)期或正在服用葉酸的高同型半胱氨酸血癥患者的靜脈全血或口腔拭子等樣本DNA中的MTHFR基因多態(tài)性進(jìn)行體外定性檢測(cè)的試劑，用于葉酸的用藥指導(dǎo)。一起來學(xué)習(xí)人MTHFR基因多態(tài)性檢測(cè)試劑臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)要點(diǎn)。
近日，國家藥監(jiān)局發(fā)布了《人MTHFR基因多態(tài)性檢測(cè)試劑注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》（2025年第4號(hào)），人MTHFR基因多態(tài)性檢測(cè)試劑采用熒光探針PCR法，對(duì)預(yù)期或正在服用葉酸的高同型半胱氨酸血癥患者的靜脈全血或口腔拭子等樣本DNA中的MTHFR基因多態(tài)性進(jìn)行體外定性檢測(cè)的試劑，用于葉酸的用藥指導(dǎo)。一起來學(xué)習(xí)人MTHFR基因多態(tài)性檢測(cè)試劑臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)要點(diǎn)。
人MTHFR基因多態(tài)性檢測(cè)試劑臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)要點(diǎn)
臨床試驗(yàn)的開展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家藥品監(jiān)督管理局通告2021年第72號(hào)）的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后的要求。
1.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)
應(yīng)選擇不少于3家（含3家）已備案的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，按照相關(guān)法規(guī)、指導(dǎo)原則的要求開展臨床試驗(yàn)。申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)及預(yù)期用途，綜合不同地區(qū)人種和流行病學(xué)背景等因素選擇臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)具有分子生物學(xué)方法檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，操作人員應(yīng)熟悉臨床試驗(yàn)方案及檢測(cè)系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)。
2.臨床試驗(yàn)方法
2.1對(duì)于有已上市同類產(chǎn)品（突變位點(diǎn)為C677T，rs1801133）的產(chǎn)品，建議申請(qǐng)人選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市的同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，采用試驗(yàn)體外診斷試劑與之進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究，評(píng)價(jià)申報(bào)產(chǎn)品的臨床性能。對(duì)比試劑的選擇應(yīng)從預(yù)期用途、樣本要求、檢測(cè)性能等方面，確認(rèn)其與申報(bào)產(chǎn)品具有較好的可比性。
2.2如申報(bào)新的突變位點(diǎn)用于葉酸用藥指導(dǎo)，應(yīng)根據(jù)其公認(rèn)的臨床意義，提供其適用人群相應(yīng)的臨床意義的證據(jù)及性能驗(yàn)證臨床試驗(yàn)。性能驗(yàn)證臨床試驗(yàn)中可以選擇公認(rèn)的參考方法（如Sanger測(cè)序法）作為對(duì)比方法，評(píng)價(jià)其突變位點(diǎn)的檢測(cè)性能。臨床意義的證據(jù)應(yīng)包括新的突變位點(diǎn)基因型與血液同型半胱氨酸含量、紅細(xì)胞中葉酸含量，服用葉酸劑量與相應(yīng)結(jié)局的相關(guān)性研究證據(jù)。
針對(duì)Sanger測(cè)序和相關(guān)性研究分析方法（如涉及）的建立、驗(yàn)證和質(zhì)量控制，應(yīng)提交詳細(xì)的研究論述，相關(guān)內(nèi)容納入臨床試驗(yàn)報(bào)告中。
3.受試者選擇和樣本類型
3.1受試者選擇
臨床試驗(yàn)中應(yīng)選擇高同型半胱氨酸血癥患者作為適用人群。如需要服用或正在服用葉酸的H型高血壓等心腦血管疾病患者等。
如涉及新的位點(diǎn)及臨床使用場(chǎng)景，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)的適用人群納入受試者。
3.2 樣本類型
適用的樣本類型一般為靜脈抗凝全血，應(yīng)采用相同樣本類型的已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較研究。
如產(chǎn)品同時(shí)適用于口腔拭子，可與相同樣本類型或靜脈全血的已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較研究；也可采用與申報(bào)產(chǎn)品的靜脈全血進(jìn)行同源比對(duì)的方式進(jìn)行評(píng)價(jià)，純合突變型/雜合突變型/野生型樣本例數(shù)建議均不少于100例。
臨床試驗(yàn)中應(yīng)以臨床原始樣本進(jìn)行試驗(yàn)，不應(yīng)直接采用提取的基因組DNA。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)同時(shí)滿足申報(bào)產(chǎn)品說明書以及對(duì)比試劑說明書（如適用）的相關(guān)要求。
4.臨床試驗(yàn)樣本量
臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算，同時(shí)應(yīng)滿足法規(guī)最低樣本量的要求。根據(jù)相應(yīng)臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)，本臨床試驗(yàn)可依據(jù)申報(bào)產(chǎn)品相對(duì)于對(duì)比試劑的純合突變型/雜合突變型/野生型符合率分別估算相應(yīng)的最低樣本例數(shù)。
與對(duì)比試劑的比較研究中，臨床樣本量的估算建議采用單組目標(biāo)值法進(jìn)行計(jì)算，純合突變型/雜合突變型/野生型符合率的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P0）建議均不低于95%。當(dāng)評(píng)價(jià)指標(biāo)PT接近100%時(shí)，該樣本量估算方法可能不適用，應(yīng)考慮選擇更加適宜的方法進(jìn)行樣本量估算和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，如精確概率法等。
5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
依據(jù)年齡、性別和臨床診斷背景信息等，對(duì)納入統(tǒng)計(jì)的病例進(jìn)行人口學(xué)分析。
總結(jié)野生型、雜合突變型和純合突變型的例數(shù)，以3×3表分別總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果，并分別計(jì)算各基因型的符合率、總體符合率及其95%置信區(qū)間，對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行kappa檢驗(yàn)，以評(píng)價(jià)兩種試劑檢測(cè)結(jié)果的一致性；以交叉四格表分別總結(jié)兩種試劑對(duì)野生型及突變型（包括雜合突變型和純合突變型）的定性檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算符合率、總符合率及其95%置信區(qū)間，并對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行kappa檢驗(yàn)，以驗(yàn)證兩種試劑檢測(cè)結(jié)果的一致性。
對(duì)于兩種試劑檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本，應(yīng)采用合理方法進(jìn)行復(fù)核，并對(duì)差異原因進(jìn)行分析。
6.倫理學(xué)要求
臨床試驗(yàn)必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準(zhǔn)則。研究者應(yīng)考慮臨床試驗(yàn)用樣本的獲得和試驗(yàn)結(jié)果對(duì)受試者的風(fēng)險(xiǎn)，提請(qǐng)倫理委員會(huì)審查，并獲得倫理委員會(huì)的同意。注冊(cè)申報(bào)時(shí)應(yīng)提交倫理委員會(huì)的審查意見。
7.臨床試驗(yàn)方案
各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。
試驗(yàn)方案應(yīng)確定嚴(yán)格的入選/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已入選的樣本被排除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程和結(jié)果判定時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。
8.質(zhì)量控制
臨床試驗(yàn)開始前，建議進(jìn)行臨床試驗(yàn)的預(yù)試驗(yàn)，以熟悉并掌握相關(guān)試驗(yàn)方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗(yàn)誤差。整個(gè)試驗(yàn)過程都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及精密度。
9.臨床試驗(yàn)小結(jié)與報(bào)告
臨床試驗(yàn)的小結(jié)與報(bào)告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。臨床試驗(yàn)報(bào)告的撰寫參考《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的相關(guān)要求。